Clínica Equina S.R.L.
Av. Leandro N. Alem 1698
(2752) Capitán Sarmiento
Buenos Aires - Argentina

Tel: (02478) 481658/481764

www.clinicaequina.com.ar

 

Webmaster

 

iiPCR: insulated isothermal plymerase chain reaction


Estimados Colegas,

Con gran satisfacción nos comunicamos con ustedes a fin de informarles que se encuentra disponible en nuestra CLINICA EQUINA de Capitán Sarmiento un nuevo y revolucionario sistema de diagnóstico por PCR, con la tecnología insulated isothermal plymerase chain reaction (iiPCR). Esto no hubiese sido posible sin el apoyo y esfuerzo de la empresa IMMUNOLOGY srl.

Que es básicamente el PCR y como funciona?.
Es una técnica de biología molecular, cuyo objetivo es obtener un gran numero de copias de un fragmento de ADN en particular, lo que se llama amplificación, con lo cual resulta más fácil identificar luego virus, bacterias, etc. La biología molecular ha tenido un desarrollo extraordinario en las últimas décadas, ocupando un lugar preponderante tanto en el diagnóstico como en la investigación, y en veterinaria ya es una realidad.

El iiPCR tiene una sensibilidad analítica de 10 copias por reacción, y es equivalente al real-time PCR. Permite una rápida detección del patógeno buscado, con resultados precisos en 1,5 horas !. Como puede apreciarse en los archivos adjuntos, estos tests han sido validados por científicos reconocidos en centros de investigación prestigiosos, como el Maxwell Gluck Equine Research Center o el Ohio State Animal Disease Diagnostic Lab. En otro de los archivos se pueden ver lo innumerables trabajos científicos publicados sobre el uso de esta técnica.

Reacciones disponibles:

  • EHV-1 (Herpes 1)
  • EHV-4 (Herpes 4)
  • Salmonella sp
  • Influenza H3N8
  • Leptospirosis lip32
  • EAV (Arteritis viral equina) disponible en 2 semanas.
  • Rotavirus - disponible en 2 semanas.
  • Streptococcus equi - disponible en 2 semanas.
  • CEM Metritis Contagiosa Equina (Taylorella equigenitalis) – eventualmente se importará si se aprobase como control válido para exportación/importación.
En que casos concretos podría ser útil el iiPCR?
  • En un aborto, poder diagnosticar EHV-1 (Herpes-1), Salmonella , EVA (Arteritis Viral equina) y Leptospirosis en el mismo dia !
  • En casos de enfermedad respiratoria, diagnosticar Influenza, EHV-4 o EVA.
  • En casos de diarrea, poder diagnosticar Salmonella y Rotavirus.
  • Identificar portadores inaparentes de Streptococcus equi

Los casos posibles son multiples. Creemos que podría convertise en una herramienta diagnóstica invalorable para los clínicos.





PROGESTERONA: nuevo test diagnostico por ELISA en 45 minutos


Estimados Colegas,

Por medio de la presente les comunicamos que a partir del Jueves 16 de Junio estará disponible en nuestro laboratorio de CLINICA EQUINA srl el kit OVUCHECK PREMATE 10, de laboratorios BIOVET, Canada. El mismo es un ELISA Se adjunta una publicación científica del Can vet J 2007; 48:823-826 : Accuracy of a rapid enzyme-linked immunosorbent assay to measure progesterone in mares.

Se adjunta una publicación científica del Can vet J 2007; 48:823-826 : Accuracy of a rapid enzyme-linked immunosorbent assay to measure progesterone in mares.

Alli se describe la muy buena correlación en sensibilidad, especificidad, y valores de predictividad positiva y negativa que se encontraron entre este test de ELISA y los de radioinmunoensayo y quimioluminiscencia.

Tambien se incluye un inserto sobre la interpretación de los resultados obtenidos.

Un resultado BAJO ( igual o menos de 3 ng/ml) podría indicar lo siguiente en la YEGUA VACIA:

  • Ausencia de un cuerpo lúteo funcional.
  • Está en estro.
  • Está en anestro.
  • Acaba de ovular.
  • Está en el final del diestro.
Se debe repetir en2-3 dias. Si el resultado es mayor a 3 ng/ml, la yegua se encuentra en el periodo diestro medio, post ovulación.

Un resultado MEDIO (entre 3 ng/ml y 10 ng/ml) podría indicar lo siguiente en la YEGUA:
  • Está en diestro.
  • Está preñada.
Repetir 2-3 dias.

Un resultado ALTO (más de 10 ng/ml) podría indicar lo siguiente en la YEGUA :
  • Está en diestro.
  • Está preñada.
Repetir 3-4 dias.

Que utilidad puede aportar conocer el nivel sérico de progesterona?
- En casos de anestro. La concentración de progesterona es útil para determinar si el anestro es debido a inactividad ovárica ( con progesterona baja, menor a 1 ng/ml, y estrógenos bajos, menos de 10 pg/ml) o si es debido a un cuerpo lúteo retenido y así una fase luteal prolongada ( con progesterona alta, mayor a 2 ng/ml).

- Para asegurarse de la correcta regresión funcional del cuerpo lúteo luego del tratamiento del mismo con prostaglandinas.

- Para asegurarse de que los niveles hormonales sean los correctos durante la preñez. Constituye una herramienta más para evitar la pérdida de la preñez. Además, en ciertos casos permite evitar tratamientos hormonales, y así lograr un gran ahorro de esfuerzo y dinero.

- Para determinar si aquellas yeguas que no muestran signos clínicos de celo realmente no están ciclando. Muchas de ellas no muestran celo por stress.

- Instaurar el tratamiento con progesterona de yeguas preñadas que presenten cuadros de placentitis, cólico o enfermedades sistémicas severas.

Sin embargo, no se deben tomar los resultados del dosaje de hormonas como valores absolutos. Si, en cambio, es más importante caracterizar los perfiles hormonales a través del tiempo, lo que reflejará el buen funcionamiento de los mecanismos que regulan la secreción hormonal.


Cuándo medir los niveles hormonales durante la preñez?
Lo más importante es basar las decisiones en la historia de la yegua. Lo recomendable sería chequear los niveles de progesterona post servicio (día 5 a 8) para comprobar la funcionalidad del cuerpo lúteo, al confirmar la preñez (día 17 post servicio), suplementando a toda yegua con niveles menores a 4 ng/ml. Luego rechequear a los 45 días, si los niveles siguen por debajo de 4 ng/ml, continuar hasta el día 120, y ahí medir nuevamente el nivel de progesterona.
La primer medición post servicio permite evaluar la calidad del cuerpo lúteo primario como productor de progesterona.
La elección de medir progesterona al día 17 se relaciona con el hecho de que algunas yeguas tendrán valores superiores a 4 ng/ml hasta el día 14, y luego ese nivel puede caer debido a la falta de inhibición de la liberación de prostaglandinas.
A los 45 días se habrán formado las copas endometriales, las cuales producen gonadotrofina coriónica equina, que cumple un rol clave en la formación y mantenimiento de los cuerpos lúteos. Es por esto que recomendamos medir al día 45 los niveles hormonales, estaremos evaluando la funcionalidad de los cuerpos lúteos en conjunto (primario y secundarios).
Por último, a los 120 días de preñez la unidad feto-placentaria asume el rol productor de hormonas para mantener la preñez, he aquí la importancia de medir en este momento los valores hormonales.




El laboratorio CLINICA EQUINA S.R.L. ha superado exitosamente las auditorias del OAA realizadas en los años 2012, 2013, 2014, 2015 y 2016, en el marco de la acreditación como Laboratorio de Ensayo Nº LE 176 bajo la norma de calidad ISO/IEC 17025:2005 para realizar el diagnostico de A.I.E. (Anemia Infecciosa Equina).

Dicha acreditación se encuentra registrada como Laboratorio de Ensayo Nº LE 176 por el O.A.A. (Organismo Argentino de Acreditación), bajo la Norma de calidad IRAM 301:2005, equivalente a la Norma ISO/IEC 17025:2005, por cumplir con los requerimientos establecidos y los documentos para su evaluación y acreditación, y reconoce su competencia para la realización del ensayo Diagnóstico de Anemia Infecciosa Equina por la Técnica de Inmunodifusión en gel de agar. Manual de animales terrestres.OIE. Capítulo 2.5.6. de mayo de 2013"

Las Normas de calidad son indispensables para acceder al mercado internacional, además de ser necesarias para pertenecer a la Red Oficial de Laboratorios de SENASA como Laboratorio Autorizado. Esto nos permite tanto realizar tests de AIE que cumplan con los requisitos internacionales, como asi tambien asegurar a los clientes del mercado interno un servicio competente y de calidad.


Recomendaciones para el testeo de anticuerpos
Anti-Streptococcus equi por el método de ELISA


Streptococcus equi es agente etiológico de adenitis equina, una linfadenitis y faringitis purulenta altamente contagiosa. Este patógeno clonal, no variante, de Streptococcus zooepidemicus se encuentra ampliamente distribuído por el mundo. Esto se ve facilitado por el gran movimiento equino y debido al hecho que ciertos caballos se convierten en carriers asintomáticos, liberando bacterias en forma intermitente a través de las fosas nasales. Una vez establecido un brote puede durar por meses o años; el 70 – 75 % de los caballos recuperados desarrolla una inmunidad duradera. Existen vacunas en forma de extractos inyectables (Adentis Equina, Clínica Equina S.R.L.) o como organismos vivos atenuados administrados en forma intranasal. Su uso esta indicado primariamente para poblaciones de equinos en riesgo, como ser aquellas moviéndose hacia o viviendo en una zona con historial de adenitis. La inmunización de un equino con un alto nivel de anticuerpos anti – S. equi puede causar una vasculitis inmunomediada.


Test de ELISA

La respuesta inmune al principal factor de virulencia de S. equi, la proteína M sérica, puede ser evaluada mediante nuestro test de ELISA. Este test fue desarrollado en el Gluck Center de Kentucky por el Dr. John Timoney, un reconocido experto en enfermedades estreptocócicas equinas. Este test cuantitativo es útil para el diagnóstico de infecciones recientes (pero no necesariamente corrientes) por S. equi, para determinar la necesidad de vacunaciones adicionales y como ayuda en el diagnóstico de púrpura hemorrágica y abscesos metastásicos (Timoney, 1997; Sheoran et al, 1997). El test no discrimina entre animales vacunados y respuesta a la infección. La comparación de títulos obtenidos de muestras secuenciales puede servir como indicador del status de exposición / infección. Como cualquier otro test serológico, las variaciones individuales en la respuesta inmunitaria deben tenerse en mente al interpretar resultados.

Los niveles de anticuerpos, reportadas como títulos, se caracterizan de la siguiente manera:

- Negativo: (<1:200)
No se detectan anticuerpos anti – proteína M. Esto también puede ocurrir en un equino recientemente expuesto (< 7 días post – exposición).

- Positivo Debil: (1:200 – 1:400)
Se detectan anticuerpos anti – proteína M a un muy bajo nivel. Este es un resultado dudoso, se recomienda reenviar una nueva muestra en 7 – 14 días para confirmar el diagnóstico presuntivo de adenitis o exposición a S. equi.

- Positivo Moderado: (1:800 – 1:1,600)
Se detectan anticuerpos anti – proteína M en un nivel intermedio. Este nivel puede ocurrir en un equino a las 2 – 3 semanas post – exposición o en el caso de una infección que haya ocurrido entre los 6 meses y 2 años previos.

- Positivo Fuerte: (1:3200 – 1:6400)
Se detectan anticuerpos anti – proteína M en un alto nivel. Se encuentran niveles altos 4 – 12 semanas post – infección o posteriormente a la vacunación intranasal con bacteria viva. La vacunación con extractos inyectables (Adentis Equina, Clínica Equina S.R.L.) resulta en altos niveles luego de 1 – 2 semanas. La vacunación esta contraindicada en equinos con altos niveles de anticuerpos existentes.

- Positivo muy Fuerte: (≥ 1:12,800)
Se detectan anticuerpos anti – proteína M en un muy alto nivel. Estos niveles a menudo son hallados en equinos con abscesos metastáticos o púrpura hemorrágica (vasculitis inmunomediada) luego de la exposición directa al agente. La vacunación esta contraindicada en equinos con altos niveles de anticuerpos existentes.

La interpretación de los resultados de ELISA en potrillos menores a 6 meses de edad debe hacerse teniendo en cuenta que todos o parte de los anticuerpos anti – proteína M deberían ser adquiridos por transferencia pasiva. Los potrillos reciben anticuerpos a través del calostro, pero eventualmente se vuelven susceptibles en la medida que sus niveles de IgG adquiridos pasivamente declinan con el tiempo.


- ¿Cuales son los mejores usos para este test?

El SeM ELISA mide anticuerpos IgG contra la proteína M de S. equi. Brinda un título por dilución final (hasta una dilución de 1:25,600) y los resultados son presentados como un título acompañado de una descripción interpretativa. Los títulos de IgG son útiles en las siguientes situaciones:

-Determinación del status de vacunación midiendo los niveles de anticuerpo presentes.

-Diagnóstico de abscesos aberrantes de S. equi.

-Evaluación de la predisposición al desarrollo de púrpura hemorrágica.

Los títulos de IgG no son útiles para el diagnóstico de infecciones en curso. Las muestras tomadas previo a la producción de anticuerpos (IgG) por el sistema inmune (< 21 días post – exposición) podrían presentar títulos de <1:200 (negativo).


- ¿Este ELISA, distingue entre una respuesta vacunal e infección natural?

No, la proteína M esta también presente en las cepas de S. equi utilizadas para hacer las vacunas. Tanto la vacunación como la infección natural producen respuestas de anticuerpos anti - proteína M, siendo ambas indiferenciables. Sin embargo, un título de 1 : 1600 puede ser utilizado como punto límite por debajo del cual será necesario vacunar o revacunar (booster) al animal.


- ¿Es posible que un caballo vacunado presente un título negativo(menor a 1 : 200)?

Si, hay algunas instancias en las cuales el título en un animal vacunado será negativo:

-Las muestras no deberán ser colectadas hasta al menos 21 días post-vacunación para permitirle al sistema inmune desarrollar una respuesta de IgG.

-La administración inapropiada de la vacuna puede no provocar una respuesta inmune.

-Factores individuales inherentes al animal.